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酵母细胞壁结构复杂，用一般的裂解液很难破壁。使用Trizol等试剂提取酵母RNA，也只能获得5s rRNA。本试剂盒采用蜗牛酶与裂解液（Buffer Rlysis-YS）联合作用，5分钟有效破碎酵母细胞壁。不会造成机械破壁中的RNA损伤，确保RNA的完整性。同时采用进口的吸附膜对游离的RNA进行纯化，获得的RNA纯度较高。获得的总RNA可直接用于RT-PCR、Northern Blot、斑点杂交等实验。

• 操作简单，无需研磨、匀浆等过程。
  
• RNA纯度高，OD260/OD280比值一般为2.0左右。

• 自备试剂：无水乙醇、酚:氯仿（体积比为25:24，pH4.5）等。
  
• Snailase比较难溶解，请提前将Snailase加入Snailase Storage Buffer，涡旋混匀使酶溶解，如溶解不完全，可以将Snailase置于冰箱4℃过夜溶解。待完全溶解后分装，-20℃冰箱保存备用。
  
• 按瓶身标签说明在RPE Solution中加入相应量的无水乙醇，混匀后在瓶身做好标记。于室温密封保存。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持RPE Solution中的乙醇含量。（11mL RPE Solution中应加入44mL无水乙醇；22mL RPE Solution中应加入88mL无水乙醇。）
  
• 每次使用前请检查Buffer Rlysis-YS、Buffer YK请于是否有沉淀，如有沉淀请于37℃溶解沉淀后使用。

• 取1mL过夜培养的酵母菌液，加入1.5mL RNase-free离心管中，室温10000rpm离心1min，彻底弃掉培养基，收集菌体。
  
  • 1mL过夜培养的酵母培养物离心收集，湿重约为20mg。
    
  • 收集菌体后可用500μL DEPC-treated ddH2O漂洗一次，10000rpm离心1分钟，弃上清，进一步去除残留的培养基。
• 按每20mg菌体湿重取600μL Snailase Reaction Buffer加入步骤1中的离心管，同时加入50μL实验前准备好的Snailase，37℃水浴5min。10000rpm 4℃离心2min，弃上清。
  
• 立即加入400μL Buffer Rlysis-YS，震荡混匀，65℃水浴5min。
  
• 将离心管取出，冰浴5min后加入200μL Buffer YK，混匀，12000rpm 4℃离心5min，取上清。
  
• （可选）向上清液中加入等体积酚:氯仿（体积比为25:24，pH4.5），混匀。12000rpm 4℃离心5min，取上清液。
  
  • 此步骤可提高RNA的纯度和得率。
• 向上清中加入1/2体积无水乙醇，充分混匀。
  
  • 即使出现沉淀也不要离心。
• 将吸附柱放入收集管中，用移液器将溶液全部加至吸附柱中，静置1min，室温12000rpm离心1min，倒掉收集管中废液。
  
  • 如需彻底清除RNA当中的DNA，可以搭配RNase-Free DNA清除试剂盒(货号：GS2266)。
• 将吸附柱放回收集管中，加入500μL RPE Solution，静置1min，室温10000rpm离心1min，倒掉收集管中废液。
  
  • RPE Solution使用前请检查是否按比例加入无水乙醇。
• 重复步骤8。
  
• 将吸附柱放回收集管中，室温12000rpm离心2min。
  
  • 此步绝不可省略，否则残余的乙醇会严重影响得率和后续实验。
    
  • 将吸附柱打开盖子于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残留的乙醇，乙醇的残留会影响RNA的产量和后续的实验。
• 将吸附柱放入RNase-free的1.5mL离心管中，在吸附膜中央加入30～50μL DEPC-treated ddH2O，静置2min，12000rpm离心2min，将所得到的RNA溶液置于-70℃保存或用于后续试验。
  
  • RNA在-70℃保存，以防降解，或保存在RNA保存液(货号：GS2322)中。